Mellitin CAS 20449-79-0

Habermant uvádza, že 1 μmol/l peptidu včelieho jedu môže zabrániť proliferácii nádorových buniek, ale neinhibuje rast a rýchlosť klonovania normálnych buniek.

Vlasák a spol. použil reverznú transkripciu mRNA-DNA na vytvorenie knižnice cDNA žľazy s jedom včelej kráľovnej pomocou plazmidu pBR322. Z tejto knižnice izolovali cDNA melitínu s použitím celkovej mRNA žľazy jedu včelej kráľovnej ako sondy a ďalej ju klonovali do plazmidu pUC18 na analýzu sekvencie DNA. Predpovedaná sekvencia melittínu z výsledkov analýzy sekvencie DNA bola identická so skutočne nameranou.

Zhang Qingwen začal extrahovať RNA zo žľazy jedu včelej kráľovnej na transláciu vo vajíčkach mory bavlníkovej, úspešne syntetizoval promelitín a študoval extrahované zložky mRNA. Výsledky ukázali, že mRNA melitínu s vysokou{1}}čistotou sa dá získať odstránením rRNA z celkovej RNA.

Arora porovnala schopnosť normálnych pečeňových buniek potkana proti hypoxickému poškodeniu s bunkami rakoviny pečene potkana a potvrdila, že melitínom aktivovaná fosfolipáza A2 (PLA2) môže zmierniť odolnosť buniek rakoviny pečene voči hypoxii. DUnn a kol. fúzoval protilátkový gén SCFV odvodený z myších buniek proti ľudskému myelómu a povrchovo špecifických proteínov lymfómových buniek s génom pre peptid včelieho jedu, aby skonštruoval gén proti -toxínu, ktorý dokáže zabíjať nádorové bunky. Fúzovaný gén bol exprimovaný v E. coli a rafinovaný anti-toxín preukázal svoju účinnosť pri zabíjaní nádorových buniek in vitro. Kindas a kol. extrahovali celkovú mRNA z jedových žliaz panenskej včelej kráľovnej a zistili, že melitínová mRNA obsahuje približne 400 párov báz a krátky polyA chvost. [9] Haase experimenty ukázali, že melitín môže aktivovať bunkové lipázy, vrátane fosfolipázy C (PLC), fosfolipázy D (PLD), fosfolipázy A2 (PLA2) a triglyceridov.

Li Jizhou a kol. syntetizovali gén peptidu včelieho jedu prostredníctvom mRNA cDNA reverznej transkripcie, s použitím λ GT11 založili cDNA knižnicu peptidu včelieho jedu a skrínovali pozitívne klony exprimujúce hemolytický peptid včelieho jedu pomocou protilátkových sond. Benachir a kol. použili kalceín ako fluorescenčný marker na systematické štúdium presakovania membrány vyvolaného melitínom. Predpokladá sa, že väzba medziMellitina vezikuly je veľmi rýchly a pri pôsobení melittínu niektoré vezikuly uvoľňujú všetok svoj obsah, zatiaľ čo iné zostávajú nedotknuté. Pomer uvoľňovania obsahu súvisí s molárnym pomerom melittín/lipidy. Konkrétnejšie, melitín dokáže rozlíšiť medzi intaktnými a už exsudovanými vezikulami a naznačuje, že prítomnosť negatívnych nábojov na povrchu fosfolipidovej dvojvrstvy má inhibičný účinok na lytickú schopnosť melitínu, ktorá je úmerná hustote negatívnych nábojov.

Kubo a spol. porovnávali melitín s hlavnými alkalickými proteínmi eozinofilov pomocou piatich metód cytotoxických testov. Výsledky potvrdili, že melitín sa môže vložiť do bunkovej membrány buniek K562 a vytvoriť póry, čo spôsobí prítok Ca2+, zvyšuje intracelulárnu koncentráciu Ca2+a bunkovú lýzu. Do 1 hodiny má melitín zabíjajúci účinok na všetky experimentálne leukemické bunky. Shamsher a kol. zistili, že melitín môže aktivovať fosfolipázu D a následne lyzovať bunky ľudskej monocytovej leukémie (U937).

Wang Guanlin a kol. extrahovali celkovú RNA zo žliaz včelieho jedu a amplifikovali cDNA prekurzorového proteínu melitínu pomocou RT-PCR. Ďalej zaviedli amínové štiepne miesta pred melitínovú sekvenciu prostredníctvom cielenej mutagenézy a skonštruovali sekvenciu, ktorá súvisela s melitínom - Expresný vektor peptidu zmutovaného proteínu včelieho jedu fúzovaný s čiastočnou sekvenciou galaktozidázy a výsledky sekvenčnej analýzy ukázali, že úspešne zaviedli cieľový kodón a boli spojené s - Čiastočná sekvencia čítacieho rámca bohatého na galaktoschidázu coli.

Huang Xueqiang a kol. pozorovali proapoptotický účinok melitínu na ľudské leukemické bunky a zistili, že účinok 5 mg/ml melitínu na leukemické bunky počas 4 hodín bol odlišný od účinku po 4 hodinách μ Typické apoptotické charakteristiky boli pozorované po 24 hodinách liečby s g/ml peptidu včelieho jedu. Ďalšie experimenty ukázali, že jeho indukcia bunkovej apoptózy významne korelovala so znížením expresie bcl-2 génu. Wang Qiubo a kol. umelou syntézou syntetizovali dva oligonukleotidové fragmenty AB obsahujúce špecifické miesta štiepenia a vytvorili cieľový gén pôsobením Klenowovho enzýmu. Použili reštrikčné endonukleázy Hind III a Xmn I na súčasné štiepenie cieľového génu a expresného vektora Pmal-p2 plazmidu a skonštruovali rekombinant týchto dvoch pod pôsobením T4 ligázy. Na identifikáciu akcesorných klonov sa použil doplnkový skríning a na získanie klonov expresie prokaryotických peptidov sa uskutočnilo špecifické enzymatické štiepenie a sekvenačná analýza.

Liu Ling a kol. uskutočnili štúdiu na troch bunkových líniách rakoviny pečene, SMMC-7721, BEL-7402 a Hep{11}}3B, pomocou metódy MTT na skúmanie vzťahu medzi dávkou a odozvou melitínu pri inhibícii nádorov. Výsledky ukázali, že inhibičný účinok melitínu na nádory sa pohyboval od 8 do 64 μ Pri dávke g/ml sa rýchlosť inhibície nádoru melitínu lineárne zvyšuje a vykazuje významné protinádorové účinky in vitro. Na základe tejto špekulácie to môže súvisieť so samoagregáciou melitínu pri vysokých koncentráciách. Vo vysokých koncentráciách sa väčšinou objavuje v tetramérnom stave, ktorý je účinnejší vo väzbe na bunkovú membránu v porovnaní s monomérmi, čím vytvára iónové kanály, mení permeabilitu membrány, popraská bunkovú membránu a vykazuje silný in vitro protinádorový účinok.

Li Bai, Zhang Chen a ďalší preukázali prostredníctvom výskumu genetického inžinierstva, že melitín má účinok na vyvolanie apoptózy nádorových buniek. Po transfekcii rekombinantným adenovírusom nesúcim gén melitín vykazovali niektoré bunky rakoviny pečene morfologické zmeny, ako je apoptotická morfológia, znížený objem, zaoblenie a agregácia okrajov chromatínu pod mikroskopom s inverznou fázou kontrastu. Rekombinantný adenovírus nesúci gén melitín môže účinne indukovať apoptózu v bunkách rakoviny pečene s mierou apoptózy približne 20 %, čo je vyššie ako u kontrolnej skupiny bez rekombinantného adenovírusu a netransfekovaného rekombinantného adenovírusu. To naznačuje, že indukcia apoptózy nádorových buniek je tiež jedným z mechanizmov, ktorými funguje génová terapia melitínom.

Zhao Yahua a ďalší zámerne upravili primárnu štruktúrnu sekvenciu aminokyselín v melitíne a exprimovanomMellitingénu prostredníctvom experimentov. Pokúste sa minimalizovať interakciu medzi melittínom a bakteriálnymi meningami, najmä prostredníctvom invázie membrány v kobercovom režime, aby sa spôsobila sterilizácia. Zároveň sa v dôsledku zmien v počte nábojov a molekulárnej konformácii výrazne znižuje pravdepodobnosť jeho amfifilnej interakcie s membránou krvných buniek, čím sa dosiahne cieľ inhibície hemolýzy. Hemolýza modifikovaného včelieho jedu bola výrazne znížená v porovnaní s hemolytickou aktivitou štandardnej vzorky, približne 14,3-krát.

11. augusta 2009 Daily Mail of the UK informoval, že vedci z Washingtonskej univerzity v Spojených štátoch zverejnili výsledok výskumu - pomocou nanotechnológie, vyvinuli „nano včelu“, ktorú možno vidieť iba pod mikroskopom. „Malé včely“ dokážu preniknúť do rakovinových buniek, uvoľniť peptidy včelieho jedu a jednu po druhej eliminovať rakovinové bunky. Včielka má vo vnútri aj špecializované polohovacie látky, ktoré ju môžu viesť po ceste a dostať sa priamo na postihnuté miesto. V experimente "nano včela" znížila počet rakovinových buniek u myší s rakovinou prsníka o 45%, zatiaľ čo počet rakovinových buniek u myší s rakovinou kože sa znížil o 75%.