Retatrutid(odkaz:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) je chemicky syntetizovaný dlhodobo pôsobiaci agonista GLP-1R/GIPR/GCGR polypeptidu, ktorý je určený na liečbu diabetu 2. typu u dospelých, reguláciu hmotnosti a nealkoholické stukovatenie pečene/nealkoholickú steatohepatitídu. Indikácia tohto produktu pre diabetes 2. typu u dospelých bola schválená na klinické použitie dňa 29. augusta 2023. Okrem toho je v záverečnej fáze posudzovania žiadosť o klinickú registráciu indikácií nealkoholického stukovatenia pečene/nealkoholickej steatohepatitídy. Vo svete je vo vývoji osem GLP-1R/GIPR/GCGR agonistov, z ktorých Rita's Retatrutide dosiahol najrýchlejší pokrok a v júni tohto roku spustil tretiu fázu klinického skúšania. V tom istom mesiaci Rita oznámila, že na výročnom stretnutí ADA boli zverejnené údaje o druhej fáze výskumu retatrutidu, ktoré ukazujú, že po 24 týždňoch dosiahol retatrutid (1 mg, 4 mg, 8 mg alebo 12 mg) hlavný koncový bod účinnosti. hodnotenie pre obéznych účastníkov alebo účastníkov s nadváhou bez cukrovky, s priemernou stratou hmotnosti 17,5 %. Spomedzi sekundárnych cieľových ukazovateľov sa na konci 48 týždňov liečby dosiahol priemerný úbytok hmotnosti 24,2 %. Peptid sme tiež syntetizovali v laboratóriu na základe publikovanej metódy. Špecifická metóda syntézy bude stručne opísaná a konkrétne kroky nám môžu byť zaslané e-mailom.
Metóda 1:
Podrobné kroky na syntézu Retarutidu pomocou syntézy v tuhom stave v laboratóriu sú nasledovné:
Pripravte si požadované činidlá a nástroje: vrátane aminokyselín, dichlórmetánu, uhličitanu draselného, etoxylovaného silikagélu, acetonitrilu, pyridínu, N-metylmorfolínu, zdroja diizopropyletylchloridu, kyseliny trifluóroctovej, DIPEA, aminokyselín chránených Boc a ďalších činidiel, ako aj magnetických miešadiel , rotačné odparky a iné prístroje.
(1) Syntéza aminokyselín chránených Boc: Rozpustite požadované aminokyseliny v dichlórmetáne, pridajte prášok uhličitanu draselného, rovnomerne premiešajte, pridajte etoxylovaný silikagél, pokračujte v miešaní a potom pridajte pyridín a N-metylmorfolín, aby ste získali aminokyseliny chránené Boc.
(2) Syntéza na pevnej fáze: Zmiešajte spolu acetonitril, zdroj diizopropyletylchloridu a kyselinu trifluóroctovú, rovnomerne premiešajte, pridajte pripravené Boc chránené aminokyseliny a pokračujte v miešaní, aby ste získali produkt syntézy na pevnej fáze.
(3) Deprotekčná skupina: Rozpustite syntézu na pevnej fáze v dichlórmetáne, pridajte kyselinu trifluóroctovú, rovnomerne premiešajte a potom pridajte DIPEA. Pokračujte v miešaní, aby sa získala syntéza na pevnej fáze bez chrániacej skupiny.
(4) Čistenie: Rozpustite vo vode odchránenú syntézu na pevnej fáze, upravte pH na približne 9.0 roztokom hydroxidu sodného, potom upravte pH na približne 5.0 pomocou kyseliny octovej a nakoniec čistý produkt sa vyzráža éterom.
Metóda 2:
Podrobné kroky na syntézu Retarutidu pomocou syntézy v kvapalnej fáze v laboratóriu sú nasledovné:
Pripravte si požadované činidlá a nástroje: vrátane arginínu, glycínu, acetanhydridu, trietylamínu, uhličitanu draselného, dichlórmetánu, metanolu, pyridínu, N-metylmorfolínu, acetanhydridu, octanu sodného a iných činidiel, ako aj nástrojov, ako sú miešadlá, separačné lieviky, vákuové čerpadlá, pece a chromatografické kolóny.
(1) Rozpustite arginín a glycín vo vhodnom množstve dichlórmetánu, pridajte vhodné množstvo acetanhydridu a trietylamínu a rovnomerne premiešajte miešadlom.
(2) Preneste rozpustenú zmes do pece a zahrievajte ju na 80 °C počas 1 hodiny, aby sa acetylovali aminokyselinové zvyšky.
(3) Zneutralizujte zreagovaný roztok práškovým uhličitanom draselným na neutralizáciu kyseliny octovej v roztoku za vzniku octanu sodného a potom extrahujte vytvorený peptid dichlórmetánom.
(4) Premyte roztok extrahovaného peptidu metanolom a prefiltrujte pomocou vákuovej pumpy, aby ste získali surový peptid.
(5) Surový peptid sa rozpustí vo vhodnom množstve pyridínu a N-metylmorfolínu, pridá sa vhodné množstvo anhydridu kyseliny octovej a octanu sodného a zmes sa rovnomerne mieša miešadlom.
(5) Zreagovaný roztok sa prefiltruje pomocou vákuovej pumpy, filtračný koláč sa premyje metanolom a potom sa prefiltruje pomocou vákuovej pumpy, čím sa získa konečný Restarutide.
Metóda 3:
Podrobné kroky na syntézu Retarutidu pomocou chemických metód v laboratóriu sú nasledovné:
Pripravte si požadované činidlá a nástroje: vrátane arginínu, glycínu, acetanhydridu, trietylamínu, uhličitanu draselného, dichlórmetánu, metanolu, pyridínu, N-metylmorfolínu, acetanhydridu, octanu sodného a iných činidiel, ako aj nástrojov, ako sú miešadlá, separačné lieviky, vákuové čerpadlá, pece a chromatografické kolóny.
(1) Rozpustite arginín a glycín vo vhodnom množstve dichlórmetánu, pridajte vhodné množstvo acetanhydridu a trietylamínu a rovnomerne premiešajte miešadlom.
(2) Preneste rozpustenú zmes do pece a zahrievajte ju na 80 °C počas 1 hodiny, aby sa acetylovali aminokyselinové zvyšky.
(3) Zneutralizujte zreagovaný roztok práškovým uhličitanom draselným na neutralizáciu kyseliny octovej v roztoku za vzniku octanu sodného a potom extrahujte vytvorený peptid dichlórmetánom.
(4) Premyte roztok extrahovaného peptidu metanolom a prefiltrujte pomocou vákuovej pumpy, aby ste získali surový peptid.
(5) Surový peptid sa rozpustí vo vhodnom množstve pyridínu a N-metylmorfolínu, pridá sa vhodné množstvo anhydridu kyseliny octovej a octanu sodného a zmes sa rovnomerne mieša miešadlom.
(6) Reagovaný roztok sa prefiltruje pomocou vákuovej pumpy, filtračný koláč sa premyje metanolom a potom sa prefiltruje pomocou vákuovej pumpy, čím sa získa konečný Restarutid.
Na získanie cieľovej molekuly sú potrebné viaceré reakcie organickej syntézy. Okrem toho táto metóda využíva viaceré organické činidlá a zložité prevádzkové podmienky, takže chemická syntéza Rotarutidu v laboratóriu zvyčajne nie je vhodná na výrobu vo veľkom meradle alebo priemyselné aplikácie. Pre výrobu vo veľkom meradle alebo pre priemyselné aplikácie je bežnejšie používanou metódou príprava Rotarutidu prostredníctvom metód syntézy, ako je biosyntéza alebo syntéza v kvapalnej fáze, ktoré sú relatívne malé v laboratórnom meradle, relatívne jednoduché v prevádzke a vhodné na prípravu malých množstiev produktov. . Retarutid získaný týmito spôsobmi má podobnú alebo podobnú štruktúru a biologickú aktivitu ako Retarutid syntetizovaný chemickými metódami, ale má výhody vyššieho výťažku a jednoduchšej prípravy. Zároveň majú aj lepší potenciál industrializácie a širšie perspektívy uplatnenia.
Metóda 4:
Podrobné kroky na syntézu Retarutidu pomocou biologických metód v laboratóriu sú nasledovné:
Príprava požadovaných génov a činidiel: Získajte plazmidy obsahujúce gén Retatrutide z génovej knižnice, transformujte plazmidy bunkami príjemcu (ako je Escherichia coli) a získajte inžinierske baktérie obsahujúce gén Retatrutide.
(1) Kultivácia inžinierskych baktérií: Pri vhodnej teplote, pH a podmienkach koncentrácie iónov použite kultivačné médium na kultiváciu inžinierskych baktérií, ktoré im umožní množiť sa vo veľkých množstvách.
(2) Extrakcia Retarutidu: Kultivované inžinierske baktérie sa rozdrvia pomocou drviča a bunkové fragmenty sa oddelia od Retarutidu pomocou metód, ako je ultrafiltrácia a sedimentácia, čím sa získa surový produkt.
(3) Čistenie Retarutidu: Surový Retarutid sa čistí pomocou chromatografickej technológie, aby sa získal vysoko čistý Retarutid.
Detekcia a identifikácia Rotarutidu: Použite vysokoúčinnú kvapalinovú chromatografiu, hmotnostnú spektrometriu, nukleárnu magnetickú rezonanciu a iné techniky na detekciu a identifikáciu štruktúry purifikovaného Rotarutidu.
Rovnica chemickej reakcie pre biologickú syntézu Retarutidu v laboratóriu zahŕňa hlavne chemické reakcie počas procesu génovej expresie, vrátane dvoch krokov: transkripcie a translácie.
Transkripcia: Dvojvláknová DNA sa otvára pomocou jedného vlákna ako templátu na syntézu vlákien RNA, čo vyžaduje zapojenie RNA polymerázy. Reakčná rovnica je nasledovná:
Dvojvláknová DNA: DNApol → mRNA+DNApol
Preklad: Ribozómy sa viažu na mRNA, aby syntetizovali peptidové reťazce, čo je proces, ktorý si vyžaduje účasť aminokyselín a energie. Reakčná rovnica je nasledovná:
Ribozóm+mRNA → Peptidový reťazec+GDP+Pi+H2O
Peptidový reťazec+ATP → Peptidový reťazec+AMP+PPi
Medzi nimi DNApol predstavuje DNA polymerázu; MRNA predstavuje messenger RNA; Ribozómy predstavujú ribozómy; Peptidové reťazce predstavujú polypeptidové reťazce; GDP predstavuje guanozíndifosfát; Pi predstavuje anorganickú kyselinu fosforečnú; H20 predstavuje vodu; ATP predstavuje adenozíntrifosfát; AMP predstavuje adenozínmonofosfát; PPi predstavuje anorganický pyrofosfát. Tieto reakcie vytvárajú peptidové reťazce potrebné na syntézu Retarutidu, ktoré sú potom spracované a modifikované v neskorších fázach, aby sa získal Retarutid.
Vyššie uvedené sú bežné metódy syntézy Rotarutidu v laboratóriu, pričom každá má iné výhody, nevýhody a rozsah použitia. Laboratórium zvyčajne používa metódy syntézy v kvapalnej fáze a syntézy v pevnej fáze pre malosériovú výrobu na výskumné a experimentálne použitie; Na druhej strane priemyselná výroba využíva kombináciu biosyntézy a výroby v kvapalnej/pevnej fáze pre veľkovýrobu, aby uspokojila dopyt na trhu. Je potrebné poznamenať, že tieto metódy vyžadujú prísnu optimalizáciu stavu a kontrolu procesu, aby sa zabezpečila kvalita a čistota konečného produktu.