Icatibant(HOE 140), bežne biely prášok, molekulový vzorec C59H89N19O13S, CAS 130308-48-4. Firazyr, liek špecifický pre HAE vyvinutý spoločnosťou Shire, bol schválený FDA 25. augusta 2011 na liečbu akútnych záchvatov dedičného angioedému u dospelých vo veku 18 rokov a starších. Je to tiež tretí liek schválený FDA na liečbu záchvatov HAE. Acetát etinib má jedinečnú štruktúru podobnú bradykinínu, ale obsahuje päť aminokyselín, ktoré nie sú odvodené od bielkovín. Je to silný selektívny kompetitívny antagonista receptorov bradykinínu typu 2 (B2), ktorý lieči akútnu HAE inhibíciou účinkov bradykinínu súvisiacich s lokálnym opuchom, zápalom a symptómami bolesti v oblasti embólie. HAE je len jednou z niekoľkých možných indikácií na jej liečbu, pričom medzi ďalšie potenciálne indikácie patrí astma, cirhóza a iné typy cievneho edému. Tento produkt má teda vysokú liečivú hodnotu a široké vyhliadky na trhu.
|
Prispôsobené uzávery fliaš a zátky:
|
|
|
Chemický vzorec |
C59H89N19O13S |
|
Presná hmotnosť |
1304 |
|
Molekulová hmotnosť |
1305 |
|
m/z |
1304 (100.0%), 1305 (63.8%), 1306 (20.0%), 1305 (6.6%), 1306 (4.5%), 1306 (4.5%), 1307 (4.1%), 1307 (2.9%), 1306 (2.7%), 1307 (1.7%), 1307 (1.3%), 1305 (1.0%) |
|
Elementárna analýza |
C, 54.32; H, 6.88; N, 20.40; O, 15.94; S, 2.46 |
Hereditárny angioedém (HAE) je zriedkavé autozomálne dominantné genetické ochorenie s globálnou incidenciou približne 1/50 000 až 1/100 000. Hlavným patologickým mechanizmom je nedostatok alebo abnormálna funkcia inhibítora C1 esterázy (C1-INH), ktorá vedie k nadmernej aktivácii komplementového systému a kontaktného systému, čím spôsobuje nadmernú produkciu bradykinínu. Bradykinín ako silný vazodilatátor zvyšuje vaskulárnu permeabilitu a spúšťa lokálny edém tkaniva väzbou na B2 receptory v endotelových bunkách. Tento mechanizmus sa stáva priamym spúšťačom akútnych záchvatov HAE aIcatibant, ako selektívny antagonista bradykinínového B2 receptora, sa stáva kľúčovým liekom na liečbu akútnych záchvatov HAE blokovaním tejto dráhy.
1.1 Genetické vzory a génové mutácie
HAE sa delí na typ I a typ II, pričom oba sú spôsobené mutáciami v géne SERPING1. Pacienti typu I majú hladinu C1-INH pod 30 % normálneho rozsahu, zatiaľ čo pacienti typu II majú funkčné defekty, ale normálne alebo zvýšené hladiny C1-INH. Mutácia vedie k neschopnosti C1 INH účinne inhibovať aktivitu komplementového faktora XIIa a kalikreínu, čím sa spustí kaskádová reakcia v kontaktnom systéme.
1.2 Diverzita klinických fenotypov
Klinické prejavy HAE sú vysoko heterogénne, s typickými príznakmi vrátane:
Kožný edém: Nedepresívny edém končatín, tváre a genitálií, ktorý trvá 2-3 dni a môže viesť k pigmentácii.
Edém hrdla: Najviac život ohrozujúci symptóm{0}} s výskytom približne 50 %, ktorý sa prejavuje ako ťažkosti s dýchaním a chrapot.
Ak sa nelieči, riziko udusenia môže dosiahnuť až 30 %.
Bolesť brucha: spôsobená edémom črevnej sliznice, prejavujúca sa ako ťažká kolika, nevoľnosť a vracanie, ľahko nesprávne diagnostikovaná ako akútne brucho.
Žiadna žihľavka alebo svrbenie: Na rozdiel od alergického edému nemá edém HAE kožný erytém alebo svrbenie a diagnóza sa opiera o laboratórne testovanie.
1.3 Spúšťacie faktory a vzorce záchvatov
Záchvaty HAE sú často spúšťané miernou traumou (ako sú zubné zákroky), emočným stresom, infekciami alebo hormonálnymi výkyvmi (ako sú menštruačné obdobia). Frekvencia záchvatov sa medzi jednotlivcami výrazne líši, pohybuje sa od niekoľkokrát do roka až po niekoľko krát týždenne, čo vážne ovplyvňuje kvalitu života pacientov.
2.1 Molekulárne mechanizmy aktivácie kontaktného systému
C1-INH je hlavným inhibítorom kontaktného systému, ktorý udržuje rovnováhu medzi produkciou a degradáciou bradykinínu inhibíciou aktivity faktora XIIa a kininázy. Keď je C1-INH nedostatočný:
Aktivácia faktora XIIa: Faktor XII sa spontánne aktivuje na XIIa na negatívne nabitých povrchoch (ako sú endotelové bunky), čím sa spustí endogénna koagulačná dráha.
Výroba kinázy:Icatibantaktivuje plazmatický prekalikreín, čo je kinináza, ktorá štiepi kininogén s vysokou molekulovou hmotnosťou (HK) za vzniku bradykinínu.
Aktivácia bypassu komplementového systému: XIIa súčasne aktivuje komplement C1, čo vedie k tvorbe C3 a C5 konvertáz, ďalej uvoľňuje alergénne toxíny C3a a C5a, čím sa zhoršuje zápalová odpoveď.
2.2 Biologické účinky bradykinínu a tvorba edému
Bradykinín sprostredkúva tieto účinky prostredníctvom B2 receptorov:
Vazodilatácia: Aktivácia endoteliálnej syntázy oxidu dusnatého (eNOS) a cyklického adenozínmonofosfátu (cAMP) vedie k relaxácii hladkého svalstva ciev.
Zvýšená vaskulárna permeabilita: Aktiváciou fosfolipázy A2 (PLA2) a syntézy prostaglandínov sa narušia endotelové bunkové spojenia, čo vedie k extravazácii plazmatického proteínu.
Prenos signálu bolesti: Aktivácia prechodného receptorového potenciálu kanála podtypu 1 kyseliny vanilovej (TRPV1) spúšťa neurogénny zápal a bolesť.
Pokusy na zvieratách ukázali, že myši bez B2 receptorov vykazujú významné zníženie edému po aktivácii kontaktného systému, čo potvrdzuje, že bradykinín je hlavným mediátorom HAE edému.
2.3 Amplifikačný efekt zápalovej kaskádovej reakcie
Bradykinín nielen priamo spôsobuje vaskulárny únik, ale tiež zosilňuje zápalové reakcie prostredníctvom nasledujúcich mechanizmov:
Aktivácia komplementového systému: bradykinín indukuje expresiu C3a a C5a receptorov v endotelových bunkách, čím zvyšuje účinok alergických toxínov.
Nábor zápalových buniek: podpora infiltrácie neutrofilov a eozinofilov zvýšením regulácie E-selektínu a adhéznej molekuly vaskulárnych buniek-1 (VCAM-1).
Vyvolanie uvoľňovania cytokínov: stimulácia endotelových buniek k sekrécii interleukínu-6 (IL-6) a tumor nekrotizujúceho faktora alfa (TNF-), čím sa vytvorí pozitívna spätná väzba.
Mechanizmus účinku atebanu: presná blokáda bradykinínovej signalizácie
3.1 Chemická štruktúra liečiva a väzbové charakteristiky receptora
Etibante je syntetický dekapeptid obsahujúci päť neproteínových aminokyselín (D-arginín, D-tyrozín, hydroxyprolín, tioprolín, D-izoleucín). Jeho štruktúra je veľmi podobná bradykinínu, ale môže odolávať degradácii bradykinín lyázou. Farmakodynamické štúdie ukázali, že afinita atebanu k B2 receptorom je porovnateľná s afinitou bradykinínu, ale rýchlosť disociácie je pomalšia a trvanie účinnosti sa predlžuje 2-3 krát.
3.2 Molekulárny základ konkurenčného antagonizmu
Etibatid blokuje bradykinínový signál prostredníctvom nasledujúcich metód:
Kompetícia väzby na receptor: Súťaží s bradykinínom o väzbu na pozitívne väzbové miesto B2 receptora, čím bráni bradykinínom indukovaným konformačným zmenám na receptore.
Inhibícia transdukcie signálu: Blokovanie aktivácie fosfolipázy C (PLC) a adenylátcyklázy (AC) sprostredkovanej - receptorom spojeným s G proteínom (GPCR), inhibuje prílev vápnika a produkciu cAMP.
Inhibícia internalizácie: zabraňuje internalizácii B2 receptorov po naviazaní na bradykinín, pričom zachováva expresiu receptorov na povrchu bunkovej membrány.
3.3 Podpora dôkazov z predklinických štúdií
Zvierací model: V modeli edému chodidiel potkana vyvolaného bradykinínom môže predbežná liečba atebanom znížiť objem edému o 85 %, čo je účinnejšie ako tradičné antihistaminiká.
Ex vivo vaskulárny experiment: Expozícia endotelových buniek ľudskej pupočníkovej žily bradykinínu viedla k úplnej inhibícii zvýšenej vaskulárnej permeability a produkcie oxidu dusnatého atebanom.
Validácia génového knockoutu: Myši s deficitom B2 receptora nevykazovali žiadnu odpoveď na bradykinín, čo ďalej potvrdzuje cieľovú špecifickosť.
V súčasnosti je známych veľa spôsobov syntézyIcatibant, najmä pomocou metódy syntézy v tuhej{0}}fáze, ktorá zahŕňa postupné spájanie aminokyselín.
Metóda syntézy nášho laboratória bude uvedená nižšie len ako referencia.
Pridajte 11,1 g 2-chlórtrimetylchloridovej živice so stupňom substitúcie 0,9 mmol/g do reakčnej kolóny v tuhej fáze a pridajte DMF napučiavaciu živicu počas 30 minút. Pridajte 3,50 ml LDIPEA k 12,98 g Fmoc Arg (Pbf) OH, aktivujte 5 minút, potom pridajte živicu napučanú v DMF na dosiahnutie reakčnej rovnováhy počas 10 minút, potom pridajte 3,50 ml LDIPEA, reagujte pri teplote miestnosti 45 minút a uzatvorte metanolom 20 minút. Po odstránení reakčného roztoku sa DMF premyl trikrát, nasledovalo premytie DCM trikrát a potom sa použil metanol na zmrštenie trikrát počas 3 minút, 5 minút a 8 minút, aby sa získala Fmoc Arg (Pbf) CTC živica. Stupeň substitúcie bol zistený ako 0,5 mmol/g.
Odvážte 10 mmol Fmoc Arg (Pbf) CTC živice a pridajte ju do reaktora s tuhou -fázou. Nechajte napučať v DMF počas 0,5 hodiny, potom odstráňte Fmoc ochranu dvakrát pomocou 20 % DBLK, zakaždým na 10 minút, respektíve 5 minút. Po umytí pripojte Fmoc Oic OH. Rozpustite 11,73 g Fmoc Oic OH, 4,9 g HOBt a 6,1 ml DIC v DCM (na solubilizáciu je možné pridať malé množstvo DMF), aktivujte v ľadovom vodnom kúpeli počas 7 minút, pridajte do reaktora s tuhou-fázou a nechajte reagovať pri teplote miestnosti 1-2 hodiny. Koncový bod reakcie sa stanoví ninhydrínovou metódou. Po dokončení reakcie sa reakčný roztok odstráni, premyje sa DMF a potom sa dvakrát odstráni Fmoc ochrana pomocou 20 % DBLK, zakaždým na 10 minút, respektíve 5 minút. Po premytí sa pripravte na spojenie ďalšej aminokyseliny.
Rozpustite 11,91 g Fmoc D Cit OH, 5,00 g HOAt a 11,4 g HATU v DCM (na solubilizáciu je možné pridať malé množstvo DMF), pridajte 3,87 g DIPEA do kúpeľa s ľadovou vodou na aktiváciu počas 7 minút, potom pridajte do tuhého reaktora a nechajte reagovať počas 1 hodiny pri izbovej teplote --fáza. Koncový bod reakcie sa stanoví ninhydrínovou metódou. Po dokončení reakcie sa reakčný roztok odstráni, premyje sa DMF a potom sa odstráni Fmoc ochrana pomocou 20 % DBLK. Po premytí sa pripravte na spojenie ďalšej aminokyseliny.
Rozpustite 11,49 g Fmoc Ser (tBu) OH, 5,00 g HOAt a 6,1 ml DIC v DCM (je možné pridať malé množstvo DMF ako solubilizátor), aktivujte v ľadovom vodnom kúpeli počas 7 minút, potom pridajte do reaktora s tuhou -fázou a 1-2 hodiny nechajte reagovať pri teplote miestnosti. Koncový bod reakcie sa stanoví ninhydrínovou metódou. Po dokončení reakcie sa reakčný roztok odstráni, premyje sa DMF a potom sa odstráni Fmoc ochrana pomocou 20 % DBLK. Po premytí sa pripravte na spojenie ďalšej aminokyseliny.
Rozpustite 11,79 g Fmoc Thi OH, 5,00 g HOBt a 11,37 g HBTU v DCM (na solubilizáciu je možné pridať malé množstvo DMF), aktivujte s 3,87 g DIPEA v ľadovom vodnom kúpeli počas 7 minút, potom pridajte do tuhej- fázy reaktora počas 1 hodín a 2 hodiny nechajte reagovať pri izbovej teplote. Koncový bod reakcie sa stanoví ninhydrínovou metódou. Po dokončení reakcie sa reakčný roztok odstráni, premyje sa DMF a potom sa odstráni Fmoc ochrana pomocou 20 % DBLK. Po premytí sa pripravte na spojenie ďalšej aminokyseliny.
Rozpustite 8,91 g Fmoc Gly OH, 5,00 g HOBt a 9,63 g TBTU v DCM (na solubilizáciu je možné pridať malé množstvo DMF), aktivujte s 3,63 g TMP v kúpeli s ľadovou vodou počas 7 minút, potom pridajte do reaktora s tuhou -fázou a nechajte reagovať 2 hodiny pri teplote miestnosti. Koncový bod reakcie sa stanoví ninhydrínovou metódou. Po dokončení reakcie sa reakčný roztok odstráni, premyje sa DMF a potom sa odstráni Fmoc ochrana pomocou 20 % DBLK. Po premytí sa pripravte na spojenie ďalšej aminokyseliny.
Rozpustite 12,27 g Fmoc Hyp (tBu) OH, 5,00 g HOAt a 9,66 g TATU v DCM (s pridaním malého množstva DMF ako solubilizátora), pridajte 3,63 g TMP do ľadového vodného kúpeľa na aktiváciu počas 7 minút, potom pridajte do fázového reaktora s 2-hodinovou izbovou teplotou{5}. Koncový bod reakcie sa stanoví ninhydrínovou metódou. Po dokončení reakcie sa reakčný roztok odstráni, premyje sa DMF a potom sa odstráni Fmoc ochrana pomocou 20 % DBLK. Po premytí sa pripravte na spojenie ďalšej aminokyseliny.
Rozpustite 10,11 g Fmoc Pro OH, 5,00 g HOAt a 11,4 g HATU v DCM (na solubilizáciu je možné pridať malé množstvo DMF), aktivujte s 3,87 g DIPEA v ľadovom vodnom kúpeli počas 7 minút, potom pridajte do tuhej látky a nechajte reagovať pri izbovej teplote -2 hodiny pri izbovej teplote. Koncový bod reakcie sa stanoví ninhydrínovou metódou. Po dokončení reakcie sa reakčný roztok odstráni, premyje sa DMF a potom sa odstráni Fmoc ochrana pomocou 20 % DBLK. Po premytí sa pripravte na spojenie ďalšej aminokyseliny.
Rozpustite 19,44 g Fmoc Arg (Pbf) OH, 5,00 g HOAt a 11,4 g HATU v DCM (na solubilizáciu je možné pridať malé množstvo DMF), aktivujte pomocou 3,87 g DIPEA v ľadovom vodnom kúpeli počas 7 minút, potom pridajte do reaktora v tuhom stave počas 1 hodiny pri izbovej teplote a 1-fázovú reakciu. Koncový bod reakcie sa stanoví ninhydrínovou metódou. Po dokončení reakcie sa reakčný roztok odstráni, premyje sa DMF a potom sa odstráni Fmoc ochrana pomocou 20 % DBLK. Po premytí sa pripravte na spojenie ďalšej aminokyseliny.
Rozpustite 19,44 g Fmoc D Arg (Pbf) OH, 5,00 g HOAt a 11,4 g HATU v DCM (na solubilizáciu je možné pridať malé množstvo DMF), pridajte 3,87 g DIPEA na aktiváciu v ľadovom vodnom kúpeli na 7 minút, potom pridajte do reaktora s tuhou fázou 2 hodiny pri izbovej teplote a aktivujte na 1 hodinu{5}. Koncový bod reakcie sa stanoví ninhydrínovou metódou. Po dokončení reakcie sa reakčný roztok odstráni, premyje sa DMF a potom sa odstráni Fmoc ochrana pomocou 20 % DBLK. Premyte trikrát DMF, trikrát DCM, trikrát zmršte metanolom počas 3 minút, 5 minút a 8 minút. Vysušte vo vákuu, aby ste získali peptidovú živicu Etibante acetát.
Pripravte 200 ml krakovacieho činidla, vrátane 190 ml kyseliny trifluóroctovej, 6 ml triizopropylsilánu a 4 ml vody, a predchladzujte 30 minút v chladničke. Pridajte 20,0 g acetátovej peptidovej živice Etibante do 500 ml banky s guľatým dnom, potom nalejte 200 ml pripraveného lyzačného činidla do živice, miešajte v ľadovom kúpeli, zaveďte plynný dusík a 30 minút nechajte reagovať. Ľadový kúpeľ sa odstráni a v reakcii sa pokračuje pri teplote miestnosti počas 2 hodín. Živicu prefiltrujte a filtrát zozbierajte. Živica sa premyje malým množstvom kyseliny trifluóroctovej, prefiltruje sa a filtrát sa spojí. Filtrát sa pomaly pridáva do 20 1 ľadového éteru, aby sa vytvorila biela zrazenina. Odstreďujte pri 3000 ot./min., aby ste zachytili zrazeninu. Zrazenina sa premyje 5-krát ľadovým éterom a suší sa pri zníženom tlaku, čím sa získa 10,3 g surového peptidu. ČistotaIcatibantwas detected to be>90 % pomocou HPLC.
Populárne Tagy: icatibant cas 130308-48-4, dodávatelia, výrobcovia, továreň, veľkoobchod, kúpiť, cena, hromadne, na predaj