Ako ovplyvňuje IPTG prášok expresiu proteínov s rôznym použitím kodónov?

Ahoj! Ako anIPTG prášokdodávateľa, bol som po kolená vo svete proteínovej expresie. V tomto blogu chcem hovoriť o tom, ako prášok IPTG ovplyvňuje expresiu proteínov s rôznymi použitiami kodónov.

Iptg prášok

Kód produktu: BM-2-5-133
Meno: Iptg
CAS č.: 367-93-1
MF: C9H1805S
MW: 238,3
EINECS č.: 206-703-0
Trh: Indonézia, Veľká Británia, Nový Zéland, Kanada atď.
Výrobca: BLOOM TECH Guangzhou Factory
Technologický servis: Oddelenie výskumu a vývoja-4
Poštovné: Posielanie ako ďalší necitlivý názov chemickej zlúčeniny.

 

Najprv si rýchlo prejdime, čo je IPTG. IPTG alebo izopropyl β-D-1-tiogalaktopyranozid je dobre známa chemikália v biotechnologickej oblasti. Je to analóg alolaktózy, ktorá je prirodzeným induktorom lac operónu. Jednoducho povedané, môže zapnúť gény zodpovedné za produkciu bielkovín v určitých baktériách, ako je Escherichia coli.

 

Teraz, pokiaľ ide o expresiu proteínov, použitie kodónov hrá obrovskú úlohu. Rôzne organizmy majú svoje vlastné preferencie, ktoré kodóny (súbory troch nukleotidov) používajú na kódovanie aminokyselín. Napríklad niektoré organizmy môžu používať konkrétny kodón pre špecifickú aminokyselinu častejšie ako iné.

Začnime pohľadom na vysokofrekvenčné kodóny. Proteíny kódované génmi s vysokofrekvenčnými kodónmi sa vo všeobecnosti ľahšie exprimujú. Keď zavedieme IPTG prášok do bakteriálneho systému exprimujúceho takéto proteíny, proces môže ísť naozaj hladko. IPTG sa viaže na represorový proteín lac operónu a uvoľňuje ho z oblasti operátora. To umožňuje RNA polymeráze naviazať sa na promótor a začať prepisovať gény, ktoré kódujú proteín.

 

V baktériách ako E. coli, ktoré sú veľmi bežné v proteínových expresných systémoch, sú gény s vysokofrekvenčnými kodónmi rozpoznávané ribozómami rýchlo. Ribozómy môžu účinne prekladať mRNA na proteín. Keď pridáme IPTG, v podstate dávame baktériám zelenú, aby začali tento výrobný proces rýchlym tempom. Takže pre proteíny s vysokofrekvenčným využitím kodónov môže IPTG prášok viesť k vysokej úrovni a efektívnej expresii proteínov.

 

Ale čo nízkofrekvenčné kodóny? Tu sú veci trochu komplikovanejšie. Gény s nízkofrekvenčnými kodónmi nemusia byť tak ľahko rozpoznané ribozómami v bakteriálnom hostiteľovi. Keď sa pridá IPTG na vyvolanie expresie proteínu s nízkofrekvenčnými kodónmi, ribozómy sa môžu počas translácie zastaviť. Je to preto, že majú ťažšie nájsť vhodné tRNA (transferové RNA), ktoré nesú zodpovedajúce aminokyseliny pre tieto nízkofrekvenčné kodóny.

V dôsledku toho môže byť celková hladina expresie proteínu nižšia v porovnaní s proteínmi s vysokofrekvenčnými kodónmi. Niekedy môžeme dokonca vidieť neúplné alebo nesprávne poskladané proteíny. Zastavenie ribozómov môže tiež spôsobiť stres na bakteriálnych bunkách, čo môže viesť k zníženiu rastu a životaschopnosti buniek.

Na prekonanie týchto problémov môžeme použiť niekoľko trikov. Jedným prístupom je spoločná expresia génov tRNA, ktoré rozpoznávajú nízkofrekvenčné kodóny. To môže pomôcť dodať ribozómom potrebné tRNA, čo umožní efektívnejšiu transláciu. Ďalšou možnosťou je optimalizácia samotnej génovej sekvencie. Nízkofrekvenčné kodóny môžeme nahradiť vysokofrekvenčnými kodónmi, ktoré kódujú rovnakú aminokyselinu. Tento proces sa nazýva optimalizácia kodónov.

Pokiaľ ide o náš prášok IPTG, ubezpečili sme sa, že má špičkovú kvalitu. Naši zákazníci zaznamenali skvelé výsledky v experimentoch s expresiou proteínov. Či už ide o proteíny s vysokofrekvenčnými alebo nízkofrekvenčnými kodónmi, náš IPTG dokáže efektívne vyvolať proces expresie.

Teraz mi dovoľte predstaviť niektoré ďalšie zaujímavé chemické produkty, s ktorými sa zaoberáme. Pozrite saHalofuginón hydrobromid. Má niektoré jedinečné vlastnosti a potenciálne aplikácie v oblasti výskumu. a tiež,Estrónový prášok CAS 53-16-7je ďalším produktom, ktorý naši výskumníci sledujú. A tiež máme(4S,5R)-(-)-4-METYL-5-FENYL-2-OXAZOLIDINÓN CAS 16251-45-9ktoré by mohli byť cenným doplnkom k vašim výskumným materiálom.

Ak sa teda zaoberáte výskumom expresie proteínov alebo potrebujete vysokokvalitné chemikálie pre svoje experimenty, neváhajte nás osloviť kvôli diskusii o kúpe. Sme tu, aby sme vám pomohli dosiahnuť tie najlepšie výsledky s našimi produktmi.

[1] Studier, FW, & Moffatt, BA (1986). Použitie bakteriofágovej T7 RNA polymerázy na riadenie selektívnej vysokoúrovňovej expresie klonovaných génov. Journal of Molecular Biology, 189 (1), 113-130.
[2] Gustafsson, C., Govindarajan, S., & Minshull, J. (2004). Kodónová odchýlka a expresia heterológneho proteínu. Trends in Biotechnology, 22(7), 346-353.